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KASP技术原理
KASP(竞争性等位基因特异性PCR,Kompetitive Allele Specific PCR)技术专利由英国LGC公司拥有,可对基因组中SNPs和特定位点上的InDels进行精准检测。
对于开出的KASP标记,结合KASP PCRmix可在荧光PCR检测平台上用于基因分型,如LCG SNPline,Douglas array tape、常见ABI荧光定量PCR仪等,其原理如下:
第一步:设计PCR引物与荧光探针
第二步:SNP识别
第三步:这步完成把通用标签序列引入与SNP对应的PCR产物
第四步:DNA标记后发出荧光
KASP的分型结果
得到所检测SNP或Indel的位点信息
可配合使用LGC 的数据分析软件Kraken 或KlusterCaller,得到清晰直观的实验结果。
可根据颜色不同,判断位点的基因型。
如图,如果是红色,则代表AA纯合基因型;如果是蓝色,则代表BB纯合基因型;如果是绿色,则代表AB杂合基因型。
KASP Assay开发流程